Plasmide CRISPR/Cas9 KO KIAA0664 (h): sc-407383

Présentation

CLUH (également connu sous le nom de KIAA0664) code une protéine cytosolique liant l’ARN, qui couple la biogenèse mitochondriale à l’organisation spatiale des mitochondries en régulant la stabilité, la localisation et la traduction des ARNm codés par le noyau pour des protéines mitochondriales. Il contribue à la capacité de phosphorylation oxydative et à l’homéostasie énergétique cellulaire, influençant des processus tels que les réponses au stress et l’adaptation métabolique via le contrôle de programmes d’expression génique associés aux mitochondries. Une perturbation de la régulation mitochondriale liée à CLUH peut altérer la fonction respiratoire, modifier la distribution des mitochondries et affecter des voies qui régissent la croissance et la survie cellulaires. Ainsi, CLUH est pertinent pour la recherche sur le dysfonctionnement mitochondrial et les mécanismes de maladies associées au métabolisme, notamment dans des contextes où des bioénergétiques altérées et la dynamique des organites constituent des caractéristiques majeures.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO KIAA0664 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CLUH dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CLUH, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CLUH à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine KIAA0664.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CLUH pour l'étude de la signalisation de KIAA0664, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CLUH essentiels à la fonction de KIAA0664
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CLUH pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le KIAA0664 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le KIAA0664 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CLUH. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le KIAA0664 plasmide HDR (h) et le KIAA0664 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CLUH pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CLUH définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.