Keratin 6B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421355

Panoramica

Krt6b codifica la cheratina 6B, una proteina dei filamenti intermedi di tipo II che si appaia con le cheratine di tipo I per costruire la rete citoscheletrica degli epiteli stratificati. La cheratina 6B sostiene la resistenza meccanica, il rimodellamento epiteliale e i programmi indotti dallo stress che accompagnano la riparazione delle ferite e gli stati iperproliferativi, coordinandosi con i processi di differenziazione e di organizzazione del citoscheletro. Nella cute del topo e nei relativi annessi, l’espressione di Krt6b è indotta durante lesione e infiammazione, collegando la dinamica dei filamenti di cheratina alla funzione di barriera e all’omeostasi tissutale. La disregolazione delle reti di cheratina è associata a fragilità epiteliale e a fenotipi di cheratinizzazione aberrante, rendendo Krt6b un nodo utile per studiare le risposte allo stress dipendenti dalla cheratina.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Keratin 6B (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Krt6b in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Krt6b insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Krt6b a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Keratin 6B.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Krt6b per lo studio della segnalazione di Keratin 6B, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Krt6b critici per la funzione di Keratin 6B
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Krt6b per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Keratin 6B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Keratin 6B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Krt6b. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Keratin 6B Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Keratin 6B (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Krt6b per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Krt6b definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.