Keratin 32 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-410857

概要

KRT32はケラチン32をコードしており、ケラチン32はI型の毛髪ケラチンとしてII型ケラチンと重合し、毛髪繊維の構造的完全性と機械的強靭性に不可欠な中間径フィラメントを形成します。ケラチン細胞骨格の一部として、KRT32は細胞骨格の組織化、毛包系統における上皮分化プログラム、ならびに角化構造の組み立てに寄与します。毛髪ケラチンの発現変化やケラチンネットワークの破綻は、毛幹の脆弱化表現型と関連し、ケラチンフィラメントの組み立て動態を研究するうえで扱いやすい指標となります。そのためKRT32は、細胞骨格ストレス応答、ケラチンフィラメントのターンオーバー、ならびに毛髪生物学および角化過程における遺伝子型—表現型の関係を検討する際に重要です。

Keratin 32 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるKRT32遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、KRT32内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、KRT32のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Keratin 32タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Keratin 32シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、KRT32欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Keratin 32の機能に不可欠なKRT32エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、KRT32ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Keratin 32 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびKeratin 32 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、KRT32遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Keratin 32 HDRプラスミド（h）および Keratin 32 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはKRT32ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のKRT32標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。