Plasmide CRISPR d'Activation (h) Keratin 24: sc-414948-ACT

KRT24 code la kératine 24, une protéine de filament intermédiaire de type I qui contribue à l’intégrité structurelle et à la résistance mécanique des cellules épithéliales. En tant que composant du cytosquelette de kératine, KRT24 participe à l’organisation du cytosquelette, à la cohésion intercellulaire et aux programmes de différenciation épithéliale qui influencent l’homéostasie tissulaire et la fonction barrière. Des perturbations de la composition du réseau de kératines peuvent affecter la signalisation de réponse au stress et les processus de remodelage associés à une dysrégulation épithéliale. Par conséquent, l’expression de KRT24 est fréquemment étudiée dans le cadre du développement épithélial et dans des contextes pathologiques où l’état de différenciation et l’architecture du cytosquelette sont modifiés.

Keratin 24 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de KRT24 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Keratin 24 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus KRT24 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription KRT24, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Keratin 24. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus KRT24 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Keratin 24 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Keratin 24 dans les cellules tumorales présentant une expression de KRT24 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.