KDEL receptor 2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-426263

Visão geral

Kdelr2 codifica o receptor KDEL 2, um receptor de recuperação residente no complexo de Golgi que reconhece motivos do tipo KDEL na extremidade C-terminal de proteínas solúveis do lúmen do retículo endoplasmático (RE) e medeia o seu transporte retrógrado do Golgi para o RE por meio de vesículas revestidas por COPI. Ao manter a proteostase do RE e a compartimentalização adequada de chaperonas e enzimas de dobramento, o receptor KDEL 2 sustenta a fidelidade da via secretória e limita a sinalização de estresse ligada ao controle de qualidade do RE. Esse eixo de tráfego se cruza com a regulação da resposta a proteínas mal dobradas (UPR), a maturação de glicoproteínas e a dinâmica de reciclagem Golgi–RE, que influenciam a adaptação celular ao estresse proteotóxico. A desregulação do transporte RE–Golgi e da proteostase tem sido associada à neurodegeneração, disfunção metabólica e remodelamento secretório em células tumorais, tornando Kdelr2 um nó útil para estudos mecanísticos.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO KDEL receptor 2 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Kdelr2 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Kdelr2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Kdelr2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína KDEL receptor 2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Kdelr2 para a investigação da sinalização de KDEL receptor 2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Kdelr2 críticos para a função KDEL receptor 2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Kdelr2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo KDEL receptor 2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo KDEL receptor 2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Kdelr2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo KDEL receptor 2 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR KDEL receptor 2 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Kdelr2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Kdelr2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.