Plásmido CRISPR de Activación (h) KCNQ2: sc-402492-ACT

KCNQ2 codifica la subunidad Kv7.2 de un canal de potasio dependiente de voltaje, un componente central de las corrientes neuronales de K+ tipo M que estabilizan el potencial de membrana y limitan la descarga repetitiva. Al determinar el umbral del potencial de acción y la adaptación de la frecuencia de disparo, KCNQ2 influye en la excitabilidad de los circuitos corticales e hipocampales y se integra con vías de señalización que modulan la apertura/cierre del canal y su tráfico, incluida la regulación dependiente de fosfoinosítidos en la membrana plasmática. La alteración de la función o la expresión de KCNQ2 se asocia estrechamente con trastornos del espectro epiléptico y fenotipos del neurodesarrollo, lo que la convierte en una región genética ampliamente utilizada para estudiar la biología de los canales iónicos, la dinámica de las redes sinápticas y las relaciones genotipo–fenotipo en modelos neuronales humanos.

KCNQ2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de KCNQ2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

KCNQ2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus KCNQ2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional KCNQ2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de KCNQ2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo KCNQ2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de KCNQ2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía KCNQ2 en células tumorales con expresión de KCNQ2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.