Plasmide Double Nickase (h) KCNH1: sc-405756-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) KCNH1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide KCNH1 Double Nickase (h) et le plasmide KCNH1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant KCNH1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: KCNH1 Antibody (C-11): sc-398585
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) KCNH1 | sc-405756-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) KCNH1 | sc-405756-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
KCNH1 code le canal potassique voltage-dépendant Kv10.1 (Eag1), une protéine membranaire qui contribue à façonner le potentiel de membrane au repos et la dynamique de repolarisation afin de réguler l’excitabilité cellulaire. En contrôlant le flux de K⁺, KCNH1 influence la signalisation dépendante du calcium, la progression du cycle cellulaire et les programmes de migration, qui s’articulent avec des voies couplées au potentiel de membrane. Une activité altérée de KCNH1 a été associée à des phénotypes neurodéveloppementaux et à une dérégulation des signaux prolifératifs dans plusieurs contextes expérimentaux, ce qui en fait une cible utile pour étudier comment la fonction des canaux ioniques s’intègre aux états transcriptionnels et métaboliques. Dans les cellules humaines, KCNH1 constitue un système accessible permettant de relier des propriétés électrophysiologiques à des réseaux de signalisation en aval et à des phénotypes observables.
KCNH1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus KCNH1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de KCNH1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de KCNH1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de KCNH1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.