KCC1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422973

概要

Slc12a4は、マウスのK–Cl共輸送体KCC1（SLC12A4）をコードしており、K+とCl−の細胞外への流出を共役させることで、細胞内クロライド濃度、細胞容積、ならびにイオン恒常性を調節する電気的中性のトランスポーターである。KCC1の活性は、容積調節性減少（RVD）経路、浸透圧ストレス応答、さらに膜電位や細胞骨格ダイナミクスに影響し得るクロライド依存的シグナル伝達に寄与する。造血系および免疫系の細胞系譜においては、KCC1は赤血球の水和状態や白血球の活性化状態に結び付いたイオンフラックスプログラムを支え、輸送体駆動型の生理機能を研究するための機序的背景を提供する。K–Cl輸送の調節異常は、赤血球特性の変化や、より広範な炎症性／代謝性表現型と関連づけられており、Slc12a4はイオン輸送と恒常性研究における有用な結節点となる。

KCC1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるSlc12a4遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Slc12a4内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Slc12a4のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、KCC1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、KCC1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Slc12a4欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• KCC1の機能に不可欠なSlc12a4エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Slc12a4ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• KCC1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびKCC1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Slc12a4遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  KCC1 HDRプラスミド（m）および KCC1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSlc12a4ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSlc12a4標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。