Plásmido CRISPR de Activación (h2) karyopherin α7: sc-418827-ACT-2

El gen humano KPNA7 codifica la carioferina alfa 7, un adaptador de la familia de las importinas-α que reconoce señales clásicas de localización nuclear y se asocia con la importina-β para mediar el transporte nucleocitoplasmático selectivo a través del complejo del poro nuclear. KPNA7 favorece la importación al núcleo de proteínas reguladoras implicadas en el control transcripcional, la progresión del ciclo celular y programas tempranos del desarrollo, lo que la vincula a vías más amplias de transporte nuclear y procesos asociados a la cromatina. Se han descrito una señalización desregulada de importina-α y cambios en la expresión de KPNA7 en contextos de proliferación aberrante y biología tumoral, lo que sugiere relevancia para mecanismos de localización nuclear de factores de transcripción oncogénicos y de regulación del genoma. Los reactivos para KPNA7 son útiles para dilucidar la especificidad de sus cargas, cartografiar redes de importación nuclear y evaluar cómo las perturbaciones del tráfico nuclear influyen en la expresión génica y en los fenotipos celulares en sistemas modelo humanos.

karyopherin α7 El plásmido de activación CRISPR (h2) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de KPNA7 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

karyopherin α7 El plásmido de activación CRISPR (h2) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus KPNA7 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional KPNA7, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de karyopherin α7. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo KPNA7 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de karyopherin α7 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía karyopherin α7 en células tumorales con expresión de KPNA7 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.