JRAB CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-410130

概要

MICALL2は、Rab13のエフェクターであるJRAB（MICAL-L2とも呼ばれる）をコードしており、細胞間接着部位において、小胞輸送機構とアクチン細胞骨格リモデリングを結び付ける足場タンパク質として機能します。JRABは、アドヘレンスジャンクションおよびタイトジャンクションの構築、膜リサイクリング、極性化輸送の制御に関与し、上皮バリアの完全性や方向性のある遊走に影響を与えます。Rab GTPaseやジャンクション構成因子との相互作用を介して、MICALL2は細胞骨格動態および細胞内輸送を制御する経路に寄与します。MICALL2の発現や制御の異常は、腫瘍細胞の浸潤や転移関連表現型を扱う研究で報告されており、細胞極性の喪失や運動性の機構を検討するうえで重要です。

JRAB CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるMICALL2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、MICALL2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、MICALL2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、JRABタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、JRABシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、MICALL2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• JRABの機能に不可欠なMICALL2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、MICALL2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• JRAB CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびJRAB CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、MICALL2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  JRAB HDRプラスミド（h）および JRAB HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMICALL2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMICALL2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。