Plasmide Double Nickase (m) JMJD2A: sc-432966-NIC

Kdm4a chez la souris code la déméthylase des lysines JMJD2A (KDM4A), une enzyme contenant un domaine Jumonji C qui enlève des marques histoniques répressives telles que H3K9me3/me2 et H3K36me3/me2 afin de réguler l’accessibilité de la chromatine et les programmes transcriptionnels. JMJD2A participe au contrôle épigénétique de la progression du cycle cellulaire, de la réplication et de la réparation de l’ADN, ainsi que de l’expression génique spécifique de lignée, en s’intégrant aux réseaux de remodelage de la chromatine et de facteurs de transcription. Par ses effets sur l’organisation de l’hétérochromatine et la stabilité du génome, Kdm4a est fréquemment étudié dans des voies liées à des états transcriptionnels oncogéniques, à une prolifération aberrante et aux réponses au stress. Une activité dérégulée de JMJD2A a été associée à des altérations de la différenciation et à des phénotypes de transformation, ce qui en fait un nœud mécanistique pertinent pour la recherche en épigénomique liée aux maladies.

JMJD2A Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Kdm4a dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Kdm4a. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Kdm4a. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Kdm4a.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.