Plasmide CRISPR d'Activation (h) JMJD1B: sc-404249-ACT

KDM3B (JMJD1B) code une déméthylase des histones à domaine JmjC qui enlève principalement les marques de méthylation répressives H3K9, favorisant ainsi l’accessibilité de la chromatine et l’activation transcriptionnelle. En remodelant les paysages épigénétiques, JMJD1B influence des programmes géniques spécifiques de lignée, la différenciation cellulaire et le contrôle, dépendant du contexte, de la prolifération et des réponses au stress. Son activité s’intègre à des réseaux plus larges de régulation de la chromatine et peut moduler une transcription dépendante des voies de signalisation, reliant des signaux métaboliques et développementaux aux sorties d’expression génique. Une dysrégulation de KDM3B a été rapportée dans de multiples contextes pathologiques, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques du contrôle épigénétique et des états transcriptionnels aberrants dans les cellules humaines.

JMJD1B Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de KDM3B sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

JMJD1B Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus KDM3B dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription KDM3B, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de JMJD1B. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus KDM3B natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de JMJD1B au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie JMJD1B dans les cellules tumorales présentant une expression de KDM3B silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.