Plásmido Doble Nickase (h) ITPase: sc-410841-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)ITPase consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa ITPase (h) y el plásmido de doble nickasa ITPase (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a ITPA. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ITPase Anticuerpo (A-4): sc-514409
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) ITPase | sc-410841-NIC | 20 µg | $410.00 |
El gen humano **ITPA** codifica la inosina trifosfato pirofosfatasa (ITPasa), una enzima de “depuración” del pool de nucleótidos que hidroliza trifosfatos de purinas no canónicos como ITP y dITP para evitar su incorporación errónea en el ARN y el ADN. Al limitar los ácidos nucleicos que contienen inosina, la ITPasa favorece la fidelidad de la replicación, la integridad transcripcional y procesos más amplios de mantenimiento del genoma vinculados a la reparación por escisión de bases y a las respuestas al estrés replicativo. La alteración de la actividad de ITPA modifica el metabolismo de purinas y puede aumentar la sensibilidad a desequilibrios en los pools de nucleótidos, con efectos posteriores sobre la estabilidad del ADN mitocondrial y nuclear. La variación genética o la reducción de la función de la ITPasa se ha asociado con susceptibilidad a fenotipos de daño de ácidos nucleicos y con respuestas diferenciales en estudios del metabolismo de análogos de purinas, lo que la hace relevante para investigaciones mecanísticas de la integridad genómica.
ITPase El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ITPA en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ITPA. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ITPA. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ITPA alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.