ISG15 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400996-NIC

ISG15は、I型インターフェロンや細胞ストレスによって迅速に誘導される、インターフェロン刺激性のユビキチン様修飾因子をコードする。ISG15がタンパク質基質に結合する修飾（ISGylation）は、E1酵素UBA7、E2のUBE2L6、HERC5などのE3リガーゼによって媒介され、脱ISGyl化酵素（deISGylase）USP18によって可逆的に解除されることで、ISG15は自然免疫およびタンパク質恒常性（プロテオスタシス）のネットワークに組み込まれている。ISG15は、抗ウイルス制限、インターフェロンシグナルの強度調節、翻訳やタンパク質分解・ターンオーバーの制御に影響し、状況によっては細胞外でサイトカイン様活性を示すことも報告されている。ISG15/ISGylationの制御異常は、宿主—病原体相互作用の変化、インターフェロノパチー、炎症性表現型、がんに関連した免疫シグナルなどと関連づけられており、インターフェロン経路の作用機序研究における重要な標的となっている。

ISG15 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ISG15 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ISG15内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ISG15の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ISG15が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。