Plásmido Doble Nickase (h) ISG15: sc-400996-NIC

ISG15 codifica un modificador tipo ubiquitina inducido por interferón que se induce rápidamente por los interferones de tipo I y por el estrés celular. La conjugación de ISG15 a sustratos proteicos (ISGilación) está mediada por la enzima E1 UBA7, la E2 UBE2L6 y ligasas E3 como HERC5, y se revierte por la deISGilasa USP18, integrando a ISG15 en redes de inmunidad innata y de proteostasis. ISG15 influye en la restricción antiviral, la regulación de la amplitud de la señalización del interferón y la modulación de la traducción y del recambio de proteínas, y en algunos contextos se han descrito actividades extracelulares adicionales similares a las de una citocina. La desregulación de ISG15/ISGilación se ha asociado con interacciones huésped–patógeno alteradas, interferonopatías, fenotipos inflamatorios y señalización inmunitaria relacionada con el cáncer, lo que la convierte en un objetivo relevante para estudios mecanísticos de las vías del interferón.

ISG15 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ISG15 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ISG15. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ISG15. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ISG15 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.