IRX3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404632

概要

IRX3（Iroquois homeobox 3）は、胚発生におけるパターニングや器官形成の過程で転写プログラムの確立を助ける、ホメオボックス型転写因子をコードします。IRX3は、細胞運命の決定や分化において、状況（コンテキスト）に依存した役割を担います。ヒト細胞では、IRX3は発生シグナル伝達ネットワーク（WntやBMPシグナルに関連する経路を含む）と統合的に作用し、系譜選択や組織特異的な遺伝子発現の形成に関与します。発生以外の面でも、IRX3の制御異常は代謝表現型や脂肪細胞の生物学的変化と関連づけられており、IRX3発現の破綻は複数のがんの文脈で報告されています。これらの特性により、IRX3は転写制御、分化状態、ならびに経路に駆動される遺伝子制御回路を研究する上で有用な結節点となります。

IRX3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるIRX3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、IRX3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、IRX3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、IRX3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、IRX3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、IRX3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• IRX3の機能に不可欠なIRX3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、IRX3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• IRX3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびIRX3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、IRX3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  IRX3 HDRプラスミド（h）および IRX3 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはIRX3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のIRX3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。