IRS-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421151

概要

Irs3 は、インスリン受容体基質3（insulin receptor substrate 3：IRS-3）をコードしており、活性化されたインスリン受容体および IGF-1 受容体からのシグナルを、PI3K–AKT 経路や MAPK 経路を介して下流へとつなぐ細胞質アダプタータンパク質です。IRS-3 は SH2 ドメインを持つタンパク質の結合部位となるリン酸化チロシンのドッキングサイトを提供することで、グルコース取り込み、グリコーゲン合成、脂質代謝、ならびに増殖因子依存的な細胞増殖の制御を支えます。マウスモデルでは、IRS ファミリーのシグナル伝達の変化は、インスリン抵抗性、肥満に伴う代謝機能障害、そしてエネルギー恒常性に影響を及ぼす炎症性クロストークと広く関連しています。IRS-3 を研究することは、代謝・内分泌生物学における組織特異的なシグナル伝達の偏りや、IRS パラログ間の代償的ネットワーク挙動を解明するのに役立ちます。

IRS-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるIrs3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Irs3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Irs3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、IRS-3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、IRS-3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Irs3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• IRS-3の機能に不可欠なIrs3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Irs3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• IRS-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびIRS-3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Irs3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  IRS-3 HDRプラスミド（m）および IRS-3 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはIrs3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のIrs3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。