IRF3 Double Nickase Plasmid (m): sc-424792-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das IRF3 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- IRF3 Double-Nickase-Plasmid (m) und IRF3 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Irf3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: IRF3: sc-376455
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
IRF3 Double Nickase Plasmid (m) | sc-424792-NIC | 20 µg | $410.00 |
Das murine Gen *Irf3* kodiert den Interferon-regulatorischen Faktor 3 (IRF3), einen zentralen Transkriptionsfaktor der angeborenen antiviralen Immunität, der die zytosolische Erkennung von Nukleinsäuren mit der Expression von Typ‑I‑Interferonen und interferonstimulierter Gene koppelt. Nach Aktivierung nachgeschaltet von PRR-Signalwegen einschließlich cGAS–STING, RIG-I/MDA5–MAVS und TLR3–TRIF wird IRF3 durch TBK1/IKKε phosphoryliert, dimerisiert und transloziert in den Zellkern, um entzündliche und antivirale Transkriptionsprogramme zu koordinieren. Die IRF3-Signalgebung überschneidet sich mit NF‑κB und IRF7 und beeinflusst so die Zytokinantwort, Apoptose und immunmetabolische Umprogrammierung während Infektionen und steriler Entzündung. Eine fehlregulierte IRF3-Aktivität wurde mit einer erhöhten Anfälligkeit für Virusinfektionen, aberranten Interferonantworten und entzündlichen Pathologien in Verbindung gebracht, was *Irf3* zu einem zentralen Knotenpunkt für mechanistische Studien der angeborenen Immun-Signalgebung macht.
IRF3 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Irf3-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Irf3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Irf3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Irf3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.