IRE1β Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-424138
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- IRE1β O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico IRE1β, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
IRE1β Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-424138 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Ern2 codifica a enzima 1 beta dependente de inositol (IRE1β), uma quinase/endoribonuclease transmembranar residente no retículo endoplasmático (RE) que atua como sensor de estresse na resposta a proteínas mal dobradas (UPR). Diante de estresse no RE, a IRE1β contribui para a homeostase do RE por meio da degradação regulada de RNA dependente de IRE1 e da modulação do splicing do mRNA de Xbp1, influenciando a capacidade secretória, a diferenciação epitelial e a sinalização inflamatória. Em camundongos, Ern2 é enriquecido em epitélios mucosos e secretórios, onde ajuda a coordenar a demanda por dobramento proteico com programas relacionados à barreira e às mucinas. A desregulação de vias de estresse do RE envolvendo a IRE1β é relevante para estudos de inflamação intestinal, defeitos na camada de muco, interações hospedeiro–microbiota e fenótipos de estresse metabólico em tecidos epiteliais.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO IRE1β (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Ern2 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Ern2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Ern2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína IRE1β.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Ern2 para a investigação da sinalização de IRE1β, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Ern2 críticos para a função IRE1β
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Ern2 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo IRE1β Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo IRE1β Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Ern2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo IRE1β Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR IRE1β (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Ern2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Ern2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.