IRE1β CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-424138

概要

Ern2 は、イノシトール要求性酵素1β（IRE1β）をコードしている。IRE1β は小胞体（ER）に局在する膜貫通型のキナーゼ／エンドリボヌクレアーゼであり、アンフォールドタンパク質応答（UPR）におけるストレスセンサーとして機能する。ERストレスが生じると、IRE1β は、IRE1依存性RNA分解（RIDD）の制御や Xbp1 mRNA スプライシングの調節を通じてER恒常性に寄与し、分泌能、上皮分化、炎症シグナル伝達に影響を与える。マウスでは Ern2 は粘膜性・分泌性上皮で高発現しており、タンパク質フォールディング需要と、バリア機能およびムチン関連プログラムとの協調を助ける。IRE1β を含むERストレス経路の破綻は、腸管炎症、粘液層の欠損、宿主‐微生物相互作用、ならびに上皮組織における代謝ストレス表現型の研究において重要である。

IRE1β CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるErn2遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Ern2内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Ern2のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、IRE1βタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、IRE1βシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Ern2欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• IRE1βの機能に不可欠なErn2エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Ern2ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• IRE1β CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびIRE1β CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Ern2遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  IRE1β HDRプラスミド（m）および IRE1β HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはErn2ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のErn2標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。