IP3R-II Lentiviral Activation Particles (m): sc-421193-LAC

Itpr2 kodiert den Inositol-1,4,5-trisphosphat-Rezeptor Typ 2 (IP3R-II), einen Ca2+-Freisetzungskanal in der ER-Membran, der durch Phospholipase C erzeugte IP3-Signale in zytosolische Ca2+-Transienten übersetzt. Die IP3R-II-abhängige Ca2+-Mobilisierung koordiniert Prozesse wie Sekretion, Kontraktilität, Stoffwechsel und Genexpression über Ca2+-responsive Signalwege, darunter Calmodulin-Signalisierung, CaMK, Calcineurin–NFAT sowie MAPK-Crosstalk. In Mausgeweben trägt Itpr2 zu zelltypspezifischen Ca2+-Oszillationsdynamiken und zur ER–Mitochondrien-Kopplung bei, die bioenergetische und Stressantworten prägen. Eine fehlregulierte IP3R-vermittelte Ca2+-Homöostase wird häufig im Zusammenhang mit zellulärem Stress, veränderter Erregbarkeit und Signaldefekten untersucht, die für die Biologie neurologischer, kardiovaskulärer, epithelialer und metabolischer Erkrankungen relevant sind.

IP3R-II Lentivirale Aktivierungspartikel (m) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente Itpr2-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

IP3R-II Lentivirale Aktivierungspartikel (m) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der Itpr2-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen IP3R-II-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen Itpr2-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.