IP3R-I CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421192

概要

Itpr1 は、ホスホリパーゼC（PLC）共役受容体の下流で産生される IP3 を細胞質内カルシウムシグナルへと変換する、小胞体 Ca²⁺ 放出チャネルであるイノシトール1,4,5-三リン酸受容体1型（IP3R-I）をコードしています。IP3R-I によって駆動される Ca²⁺ トランジェントは、シナプス伝達、神経細胞の興奮性、遺伝子発現、ミトコンドリア代謝を協調的に制御し、さらにオートファジーやアポトーシスといった Ca²⁺ 依存性プロセスの形成にも関与します。マウスにおいて Itpr1 は神経回路機能、とりわけ小脳プルキンエ細胞で重要性が高く、運動協調や神経変性に関連する細胞表現型の文脈で研究されることが一般的です。また、IP3R-I シグナルの異常は、ER ストレス応答や細胞内シグナル伝達ネットワークに影響する Ca²⁺ 恒常性のより広範な破綻とも関連しています。

IP3R-I CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるItpr1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Itpr1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Itpr1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、IP3R-Iタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、IP3R-Iシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Itpr1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• IP3R-Iの機能に不可欠なItpr1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Itpr1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• IP3R-I CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびIP3R-I CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Itpr1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  IP3R-I HDRプラスミド（m）および IP3R-I HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはItpr1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のItpr1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。