IP3R-I Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421192

Descripción general

Itpr1 codifica el receptor de inositol 1,4,5-trifosfato tipo 1 (IP3R-I), un canal de liberación de Ca²⁺ del retículo endoplásmico que convierte el IP3 generado aguas abajo de receptores acoplados a PLC en señales de calcio citosólicas. Los transitorios de Ca²⁺ mediados por IP3R-I coordinan la transmisión sináptica, la excitabilidad neuronal, la expresión génica y el metabolismo mitocondrial, y modulan procesos dependientes de Ca²⁺ como la autofagia y la apoptosis. En el ratón, Itpr1 es muy relevante para la función de los circuitos neuronales, en particular en las neuronas de Purkinje del cerebelo, y se estudia con frecuencia en el contexto de la coordinación motora y de fenotipos celulares asociados a neurodegeneración. La señalización alterada de IP3R-I también se asocia con defectos más amplios en la homeostasis del Ca²⁺ que afectan las respuestas al estrés del RE y las redes de señalización intracelular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO IP3R-I (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Itpr1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Itpr1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Itpr1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína IP3R-I.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Itpr1 para la investigación de la señalización de IP3R-I, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Itpr1 críticos para la función de IP3R-I
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Itpr1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido IP3R-I CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido IP3R-I CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Itpr1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR IP3R-I (m) y el plásmido HDR IP3R-I (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Itpr1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Itpr1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.