Plásmido CRISPR de Activación (h) IP Receptor: sc-404135-ACT

PTGIR codifica el receptor humano de prostaciclina (IP), un receptor acoplado a proteínas G que se une a la prostaciclina (PGI2) para regular la señalización vasodilatadora y antiagregante. Tras su activación, el receptor IP se acopla principalmente a Gs para aumentar el cAMP y activar programas transcripcionales dependientes de PKA/CREB, con un acoplamiento adicional dependiente del contexto que puede influir en la señalización del calcio y en las vías MAPK. Este receptor integra la señalización de eicosanoides derivados del ácido araquidónico para modular las interacciones endotelio–plaquetas, el tono vascular y las respuestas inflamatorias. La desregulación de la señalización PTGIR/IP se ha implicado en fenotipos cardiovasculares y tromboinflamatorios, y se estudia con frecuencia en modelos de disfunción vascular y lesión tisular mediada por el sistema inmunitario.

IP Receptor El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PTGIR sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

IP Receptor El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PTGIR en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PTGIR, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de IP Receptor. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PTGIR y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de IP Receptor en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía IP Receptor en células tumorales con expresión de PTGIR silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.