Plasmide CRISPR d'Activation (h) Integrin αM/CD11b: sc-400563-ACT

ITGAM code l’intégrine αM (CD11b), qui s’hétérodimérise avec ITGB2 (CD18) pour former le récepteur Mac-1/CR3, exprimé principalement par les cellules myéloïdes. Ce récepteur d’adhésion et de reconnaissance des motifs régule le roulement des leucocytes, l’adhésion ferme et la transmigration, et module la phagocytose, la dégranulation et l’explosion oxydative via des voies de signalisation « outside-in » impliquant les kinases de la famille Src, Syk, PI3K-AKT et MAPK. L’intégrine αM/CD11b reconnaît également des cibles opsonisées par le complément (iC3b) et contribue à la gestion des complexes immuns ainsi qu’aux programmes de cytokines inflammatoires. Des modifications génétiques et d’expression d’ITGAM sont associées à une activation innée dérégulée et ont été étudiées dans des contextes incluant l’auto-immunité, l’inflammation chronique et la biologie des cellules myéloïdes associées aux tumeurs.

Integrin αM/CD11b Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ITGAM sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Integrin αM/CD11b Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ITGAM dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ITGAM, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Integrin αM/CD11b. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ITGAM natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Integrin αM/CD11b au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Integrin αM/CD11b dans les cellules tumorales présentant une expression de ITGAM silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.