Integrin αE/ITGAE/CD103 Double Nickase Plasmid (h): sc-404333-NIC

ITGAE kodiert das Integrin αE (CD103), das mit Integrin β7 ein Heterodimer bildet und so den Adhäsionsrezeptor αEβ7 erzeugt, der an E‑Cadherin bindet und die Verankerung von Lymphozyten in epithelialen Geweben unterstützt. Dieser Rezeptor ist an der Outside‑in‑Signalübertragung von Integrinen beteiligt, die Zytoskelett-Umbau, Zellmigration und die Dynamik der immunologischen Synapse koordiniert und mit Signalwegen verknüpft ist, an denen fokale Adhäsionskinasen sowie nachgeschaltete MAPK‑ und PI3K‑Signale beteiligt sind. CD103 ist ein Kennzeichen gewebsständiger Gedächtnis‑T‑Zellen (tissue‑resident memory T cells) und bestimmter Subpopulationen dendritischer Zellen und prägt die mukosale Immunüberwachung sowie die Interaktionen mit der epithelialen Barriere. Eine veränderte ITGAE‑Expression und CD103‑positive Immuninfiltrate werden umfassend in chronisch-entzündlichen Kontexten und in tumoralen Immunmikroumgebungen untersucht, wo sie Aufschluss über Mechanismen der Lokalisierung und Funktion von Immunzellen geben.

Integrin αE/ITGAE/CD103 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ITGAE-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ITGAE abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ITGAE-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ITGAE-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.