Plasmide Double Nickase (h) Integrin α5/ITGA5/CD49e: sc-400546-NIC

ITGA5 code l’intégrine α5 (CD49e), une sous-unité α qui s’hétérodimérise avec β1 pour former le récepteur de la fibronectine α5β1, médiateur clé de l’adhésion cellule–matrice extracellulaire et de la mécanotransduction. La liaison à la fibronectine déclenche l’assemblage des adhésions focales et une signalisation via les voies FAK/SRC, PI3K–AKT et MAPK, coordonnant le remodelage du cytosquelette d’actine, la migration, la prolifération et la survie. La dynamique d’adhésion dépendante d’ITGA5 influence la transition épithélio-mésenchymateuse, les programmes angiogéniques et le remodelage tissulaire grâce à un dialogue avec les GTPases Rho et la signalisation des récepteurs aux facteurs de croissance. Une activité α5β1 dérégulée est fréquemment étudiée dans les contextes de l’invasion et des métastases tumorales, de la fibrose, ainsi que des physiopathologies vasculaires et inflammatoires, où des interactions altérées avec la matrice induisent des comportements cellulaires aberrants.

Integrin α5/ITGA5/CD49e Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ITGA5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ITGA5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ITGA5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ITGA5.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.