Integrin α5/ITGA5/CD49e Double Nickaseプラスミド (h): sc-400546-NIC

ITGA5はインテグリンα5（CD49e）をコードしており、これはβ1とヘテロ二量体を形成してα5β1フィブロネクチン受容体となるαサブユニットです。α5β1は細胞-細胞外マトリックス接着およびメカノトランスダクションの主要な媒介因子です。フィブロネクチンとの結合によりフォーカルアドヒージョンの形成が誘導され、FAK/SRC、PI3K–AKT、MAPK経路を介したシグナル伝達が起動します。これらはアクチン細胞骨格の再編成、遊走、増殖、生存を協調的に制御します。ITGA5依存的な接着ダイナミクスは、Rho GTPaseや増殖因子受容体シグナルとのクロストークを通じて、上皮間葉転換、血管新生プログラム、組織リモデリングにも影響します。α5β1活性の制御異常は、腫瘍の浸潤・転移、線維化、ならびに血管系および炎症性の病態生理といった、マトリックス相互作用の変化が異常な細胞挙動を駆動する文脈でしばしば研究されています。

Integrin α5/ITGA5/CD49e ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ITGA5 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ITGA5内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ITGA5の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ITGA5が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。