Partículas Lentivirales de Activación (h) Integrin β4/ITGB4/CD104: sc-400573-LAC

ITGB4 codifica la integrina β4 (CD104), una subunidad de integrina de unión a laminina que se empareja predominantemente con la integrina α6 para formar α6β4, un receptor de adhesión clave en las células epiteliales. Mediante el ensamblaje de hemidesmosomas y su conexión con los filamentos intermedios a través de la plectina, ITGB4 estabiliza la unión de la célula a la membrana basal y también participa en procesos de señalización que regulan la polaridad, la supervivencia y la migración. Fuera de las adhesiones estables, α6β4 puede activar vías como PI3K–AKT, MAPK y la señalización asociada a las adhesiones focales para modular la remodelación del citoesqueleto y las respuestas al estrés. La expresión o distribución desregulada de ITGB4 se estudia con frecuencia en la disfunción de la barrera epitelial, la remodelación tisular y los fenotipos de invasión/metástasis de células cancerosas, lo que la convierte en un nodo útil para investigar la señalización dependiente de la adhesión y las interacciones con el microambiente.

Las partículas de activación lentiviral Integrin β4/ITGB4/CD104 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de ITGB4 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Integrin β4/ITGB4/CD104 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción ITGB4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Integrin β4/ITGB4/CD104. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo ITGB4 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.