Integrin α4/ITGA4/CD49d Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401336

Panoramica

ITGA4 codifica l’integrina α4 (CD49d), un recettore di adesione che eterodimerizza con β1 (VLA-4) o β7 per mediare interazioni cellula–cellula e cellula–matrice con ligandi quali VCAM-1 e fibronectina. Attraverso la segnalazione “outside-in” delle integrine, ITGA4 influenza il rimodellamento del citoscheletro, la dinamica delle adesioni focali e vie a valle incluse FAK/Src, PI3K–AKT e MAPK, che regolano migrazione, sopravvivenza e stati di attivazione. L’integrina α4 è un regolatore chiave del traffico leucocitario, dell’organizzazione della sinapsi immunitaria e dell’homing tissutale, collegandola ai circuiti infiammatori e alle interazioni tumore–stroma. Un’attività o un’espressione deregolata di ITGA4 è spesso studiata in contesti di infiammazione cronica, infiltrazione di cellule immunitarie e adesione delle cellule delle neoplasie ematologiche all’interno di nicchie di supporto.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Integrin α4/ITGA4/CD49d (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ITGA4 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ITGA4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ITGA4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Integrin α4/ITGA4/CD49d.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ITGA4 per lo studio della segnalazione di Integrin α4/ITGA4/CD49d, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ITGA4 critici per la funzione di Integrin α4/ITGA4/CD49d
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ITGA4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Integrin α4/ITGA4/CD49d CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Integrin α4/ITGA4/CD49d CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ITGA4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Integrin α4/ITGA4/CD49d Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Integrin α4/ITGA4/CD49d (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ITGA4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ITGA4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.