Plasmide Double Nickase (h) INSIG-2: sc-402255-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) INSIG-2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide INSIG-2 Double Nickase (h) et le plasmide INSIG-2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant INSIG2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) INSIG-2 | sc-402255-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) INSIG-2 | sc-402255-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
INSIG2 code INSIG-2, une protéine membranaire du réticulum endoplasmique qui freine la biosynthèse du cholestérol et des acides gras en régulant la maturation de SREBP. INSIG-2 se lie à SCAP, une protéine à domaine senseur de stérols, et favorise la rétention dans le RE du complexe SCAP–SREBP en conditions riches en stérols, limitant ainsi les programmes transcriptionnels qui contrôlent le métabolisme lipidique et la biogenèse membranaire. Par ses interactions avec la machinerie des ligases d’ubiquitine, INSIG-2 contribue également au renouvellement régulé de l’HMG-CoA réductase, reliant la disponibilité en stérols au flux de la voie du mévalonate. Une expression ou une régulation altérée d’INSIG2 a été associée à des traits liés à la dyslipidémie, à l’insulinorésistance et à des phénotypes de maladies métaboliques, ce qui en fait un nœud d’intérêt pour étudier l’homéostasie lipidique dans les cellules humaines.
INSIG-2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus INSIG2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de INSIG2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de INSIG2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de INSIG2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.