Plasmide Double Nickase (h) INSIG-1: sc-401381-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) INSIG-1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide INSIG-1 Double Nickase (h) et le plasmide INSIG-1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant INSIG1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: INSIG-1 Antibody (A-9): sc-390504
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) INSIG-1 | sc-401381-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) INSIG-1 | sc-401381-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
INSIG1 code pour l’« insulin induced gene 1 » (INSIG-1), une protéine membranaire du réticulum endoplasmique qui agit comme capteur de stérols et régulateur négatif majeur de l’homéostasie lipidique. INSIG-1 se lie à SCAP et aux protéines de liaison aux éléments de réponse aux stérols (SREBP) afin de retenir le complexe SCAP–SREBP dans le RE lorsque les stérols sont abondants, limitant ainsi le processing des SREBP et la transcription en aval des gènes de biosynthèse du cholestérol et des acides gras. Par ce point de contrôle, INSIG-1 intègre une régulation par rétrocontrôle au sein des voies du mévalonate et de la lipogenèse, et interfère avec la dégradation associée au RE de composants de la voie des stérols. La dérégulation de la détection des stérols liée à INSIG1 a été étudiée dans des phénotypes métaboliques tels que la dyslipidémie, la stéatose hépatique et la résistance à l’insuline, et elle est également pertinente dans des contextes où un métabolisme lipidique altéré soutient l’adaptation cellulaire au stress.
INSIG-1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus INSIG1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de INSIG1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de INSIG1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de INSIG1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.