INPP5E Lentiviral Activation Particles (h): sc-405923-LAC

INPP5E kodiert die Inositol-Polyphosphat-5-Phosphatase E, eine Phosphoinositid-5-Phosphatase, die PI(4,5)P2 und PI(3,4,5)P3 hydrolysiert und dadurch die Phosphoinositidzusammensetzung von Membranen mitgestaltet. INPP5E ist am primären Zilium angereichert und trägt zur Identität der zilären Membran, zum Transport (Trafficking) und zur Signalübertragung bei, einschließlich der Modulation des Outputs des Hedgehog-Signalwegs sowie einer breiteren, mit PI3K–AKT verknüpften Dynamik der Lipidsignalgebung. Durch die Kontrolle von Phosphoinositid-Gradienten hilft INPP5E, die Ziliogenese, die Rezeptor-Lokalisierung und nachgeschaltete Second-Messenger-Antworten zu koordinieren. Störungen der INPP5E-Funktion sind mit Ziliopathie-Phänotypen und neuroentwicklungsbedingten Erkrankungen assoziiert, was INPP5E zu einem relevanten Ziel für mechanistische Studien zur ziliumabhängigen Signalgebung und zur Regulation von Membranlipiden macht.

INPP5E Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente INPP5E-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

INPP5E Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der INPP5E-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen INPP5E-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen INPP5E-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.