Plasmide Double Nickase (h) Inhibin β-A: sc-402676-NIC

INHBA code la sous-unité bêta-A de l’inhibine humaine, qui s’homodimérise pour former l’activine A ou s’hétérodimérise avec une sous-unité alpha pour former l’inhibine A, des régulateurs sécrétés clés de la signalisation endocrine et paracrine. L’activine A transmet principalement son signal via des récepteurs de type I/II à activité sérine/thréonine kinase, activant SMAD2/3 et modulant des programmes transcriptionnels qui contrôlent la prolifération et la différenciation cellulaires, le remodelage de la matrice extracellulaire et les réponses inflammatoires. Par des interactions croisées avec les réseaux de la superfamille TGF-β, INHBA influence la fonction gonadique, l’homéostasie des tissus reproducteurs et des processus de développement. Une dérégulation de la signalisation INHBA/activine a été associée à la fibrose, au remodelage du microenvironnement tumoral et à des altérations du comportement des cellules immunitaires et stromales, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques.

Inhibin β-A Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus INHBA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de INHBA. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de INHBA. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de INHBA.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.