ILT-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407764

Visão geral

O LILRB4 codifica o transcrito 3 do tipo imunoglobulina (ILT-3), um recetor leucocitário inibitório expresso predominantemente em células apresentadoras de antigénio de linhagem mieloide, como células dendríticas e monócitos/macrófagos. O ILT-3 contribui para a homeostase imunitária ao transduzir sinais inibitórios através do recrutamento de fosfatases dependente de ITIM, atenuando vias de ativação associadas à apresentação de antigénio, à coestimulação e à produção de citocinas inflamatórias. Por estes mecanismos, o ILT-3 ajuda a moldar a polarização das células T e programas associados à tolerância na comunicação entre compartimentos mieloide e linfoide. A expressão desregulada de LILRB4/ILT-3 tem sido estudada em contextos de inflamação crónica, evasão imunitária no microambiente tumoral e neoplasias da linhagem mieloide, em que a alteração da sinalização inibitória pode modular a vigilância imunitária e a imunidade tecidular.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO ILT-3 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene LILRB4 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do LILRB4, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do LILRB4 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína ILT-3.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de LILRB4 para a investigação da sinalização de ILT-3, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) LILRB4 críticos para a função ILT-3
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos LILRB4 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo ILT-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo ILT-3 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus LILRB4. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo ILT-3 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR ILT-3 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia LILRB4 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo LILRB4 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.