ILKAP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405879

Panoramica

ILKAP (fosfatasi 2C della famiglia PP2C associata alla integrin-linked kinase) codifica una fosfatasi della famiglia PP2C che si associa a complessi di segnalazione legati alle integrine e modula il controllo, dipendente dalla fosforilazione, dell’adesione cellulare e dell’organizzazione del citoscheletro. De-fosforilando specifici substrati all’interno di vie associate alle integrine e alla matrice extracellulare (ECM), ILKAP può influenzare la migrazione cellulare, la meccanotrasduzione e gli output di segnalazione responsivi ai fattori di crescita. Alterazioni dell’espressione o dell’attività di ILKAP sono state studiate in contesti che coinvolgono una segnalazione di adesione deregolata, risposte allo stress e un “riassetto” delle vie di segnalazione che sostiene fenotipi maligni. Di conseguenza, ILKAP viene spesso analizzata in modelli di invasione delle cellule tumorali, segnalazione di sopravvivenza e regolazione, dipendente dall’adesione, della proliferazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ILKAP (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ILKAP in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ILKAP insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ILKAP a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ILKAP.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ILKAP per lo studio della segnalazione di ILKAP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ILKAP critici per la funzione di ILKAP
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ILKAP per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ILKAP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ILKAP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ILKAP. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ILKAP Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ILKAP (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ILKAP per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ILKAP definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.