IL-5 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421112
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- IL-5 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico IL-5, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: IL-5 Anticuerpo (B-2): sc-398334
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
IL-5 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-421112 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Il5 codifica la interleucina-5 (IL-5), una citocina asociada a Th2 que coordina el compromiso de linaje, la supervivencia y la activación de los eosinófilos, y favorece la proliferación de las células B y el cambio de clase en ratones. La IL-5 señaliza a través del receptor de IL-5 (IL5RA junto con la cadena β común) para activar las vías JAK/STAT, MAPK y PI3K, modulando programas inmunitarios de tipo 2 y el tráfico de granulocitos. La actividad desregulada de la IL-5 se asocia con inflamación impulsada por eosinófilos y respuestas alérgicas de las vías respiratorias, lo que convierte a Il5 en un nodo central para analizar redes de citocinas que controlan la inmunidad mucosa. En modelos experimentales, la perturbación de Il5 se utiliza para estudiar la diferenciación leucocitaria, los circuitos quimiotácticos y la comunicación cruzada entre citocinas durante respuestas a helmintos e inflamación alérgica.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO IL-5 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Il5 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Il5 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Il5 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína IL-5.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Il5 para la investigación de la señalización de IL-5, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Il5 críticos para la función de IL-5
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Il5 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido IL-5 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido IL-5 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Il5. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR IL-5 (m) y el plásmido HDR IL-5 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Il5 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Il5 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.