IL-33 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-417699-ACT

Human IL33 kodiert IL-33, ein nukleär assoziiertes Zytokin der IL-1-Familie, das als Alarmin fungiert und bei zellulärem Stress oder Gewebeschädigung freigesetzt wird, um angeborene und adaptive Immunantworten zu aktivieren. Extrazelluläres IL-33 signalisiert vor allem über den ST2/IL1RL1-Rezeptorkomplex und stimuliert die Aktivierung der NF-κB- und MAPK-Signalwege, wodurch Typ-2-Entzündungen, die Aktivierung myeloider Zellen und Programme der Gewebereparatur geprägt werden. IL-33 beeinflusst den Austausch zwischen Epithel, Stroma und Immunzellen in Barrieregeweben und wurde mit allergischer Atemwegsentzündung, atopischen Erkrankungen und weiteren Formen chronischer Entzündung in Verbindung gebracht. Eine fehlregulierte IL-33-Aktivität ist zudem mit Fibrose und veränderten Signalen im Tumormikromilieu assoziiert und stellt damit einen relevanten Knotenpunkt für mechanistische Studien entzündlicher Schaltkreise dar.

IL-33 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen IL33-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

IL-33 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des IL33-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der IL33-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen IL-33-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native IL33-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von IL-33-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des IL-33-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem IL33-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.