Plasmide CRISPR d'Activation (h) IL-2Rγ: sc-401876-ACT

IL2RG code la chaîne gamma commune (IL‑2Rγ, CD132), une sous-unité de signalisation partagée par plusieurs récepteurs de cytokines, notamment ceux de l’IL‑2, l’IL‑4, l’IL‑7, l’IL‑9, l’IL‑15 et l’IL‑21. Lors de la liaison d’une cytokine, l’IL‑2Rγ coopère avec des chaînes partenaires du récepteur pour déclencher l’activation de JAK1/JAK3 et la signalisation STAT en aval, coordonnant le développement, la survie et la différenciation effectrice des lymphocytes. Cette voie est centrale dans la biologie des cellules T, NK et B, et façonne plus largement l’homéostasie immunitaire via des programmes transcriptionnels dépendants des cytokines. La perturbation ou la dérégulation de la signalisation associée à IL2RG est liée à des phénotypes d’immunodéficience profonde et constitue un axe exploitable pour étudier les dépendances aux réseaux de cytokines dans les cellules immunitaires humaines.

IL-2Rγ Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IL2RG sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IL-2Rγ Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IL2RG dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IL2RG, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IL-2Rγ. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IL2RG natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IL-2Rγ au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IL-2Rγ dans les cellules tumorales présentant une expression de IL2RG silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.