Plasmide CRISPR d'Activation (h) IL-2Rβ: sc-403250-ACT

IL2RB code la chaîne bêta du récepteur humain de l’interleukine‑2 (IL‑2Rβ ; CD122), une sous-unité de signalisation partagée par les complexes récepteurs de l’IL‑2 et de l’IL‑15, essentielle à l’activation et à l’homéostasie des lymphocytes. Après liaison de la cytokine, IL‑2Rβ coopère avec IL2RG et IL2RA/IL15RA pour déclencher des cascades de phosphorylation dépendantes de JAK1/JAK3, qui activent STAT5 et s’articulent avec les voies PI3K–AKT et MAPK. Cette signalisation coordonne la prolifération, la différenciation et la survie des lymphocytes T, ainsi que le développement et la fonction effectrice des cellules NK. Une activité ou une expression dérégulée d’IL2RB peut perturber la tolérance immunitaire et les réponses cytotoxiques, ce qui en fait une cible largement utilisée dans les études mécanistiques de la régulation immunitaire et de la biologie des maladies inflammatoires.

IL-2Rβ Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IL2RB sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IL-2Rβ Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IL2RB dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IL2RB, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IL-2Rβ. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IL2RB natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IL-2Rβ au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IL-2Rβ dans les cellules tumorales présentant une expression de IL2RB silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.