Plasmide Double Nickase (h) IKKγ: sc-400274-NIC

IKBKG code pour IKKγ (NEMO), la sous-unité régulatrice du complexe IKK qui relie la signalisation en amont des récepteurs à la phosphorylation et à la dégradation des protéines IκB, permettant ainsi les réponses transcriptionnelles de NF‑κB. Sous l'influence de signaux provenant du TNFR, de l'IL‑1R/TLR, des récepteurs antigéniques et des voies de stress cytosolique, IKKγ contribue à coordonner l'expression des gènes inflammatoires, la signalisation immunitaire innée et adaptative, les programmes de survie cellulaire et les réponses aux dommages de l'ADN. La perturbation d'IKBKG affecte l'activation de la voie canonique de NF‑κB et peut modifier les réseaux de cytokines, la sensibilité à l'apoptose et l'homéostasie des barrières/du compartiment ectodermique. Des variants d'IKBKG sont associés à des phénotypes d'immunodéficience et de dysplasie ectodermique, et une régulation aberrante de NF‑κB est largement pertinente pour l'étude des mécanismes des maladies inflammatoires et de la signalisation oncogénique.

IKKγ Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus IKBKG dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de IKBKG. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de IKBKG. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de IKBKG.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.