Plasmide CRISPR d'Activation (h) Ikaros: sc-400530-ACT

IKZF1 code Ikaros, un facteur de transcription à doigts de zinc qui coordonne l’engagement des lignages hématopoïétiques et la différenciation des cellules immunitaires, avec des rôles majeurs dans le développement des cellules B et la maturation des cellules T. Ikaros régule l’accessibilité de la chromatine et des programmes d’expression génique à longue distance en se liant à des éléments régulateurs et en interagissant avec des complexes corépresseurs et de remodelage de la chromatine, façonnant ainsi des réseaux transcriptionnels qui contrôlent la prolifération, l’apoptose et la signalisation des cytokines. Une activité ou une expression altérée d’IKZF1 est associée à une dérégulation immunitaire et à la biologie des maladies hématologiques, ce qui en fait une cible largement étudiée dans les voies régissant l’homéostasie lymphoïde et les états de différenciation.

Ikaros Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IKZF1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Ikaros Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IKZF1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IKZF1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Ikaros. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IKZF1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Ikaros au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Ikaros dans les cellules tumorales présentant une expression de IKZF1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.