Plasmide Double Nickase (h) IGFBP5: sc-400945-NIC

IGFBP5 (insulin-like growth factor binding protein 5) est un régulateur sécrété, associé à la matrice extracellulaire, de la signalisation des IGF. Il module la disponibilité d’IGF-I/IGF-II et leur engagement avec les récepteurs, influençant ainsi l’activité des voies PI3K–AKT et MAPK. Au-delà de la séquestration des IGF, IGFBP5 participe à des programmes d’adhésion, de migration et de survie cellulaires via des interactions avec la matrice et des effets indépendants des IGF dépendant du contexte. Dans les tissus humains, l’expression d’IGFBP5 est liée à des processus de différenciation et de remodelage, notamment des réponses ostéogéniques et fibrotiques, et elle est fréquemment étudiée dans des situations où une signalisation des facteurs de croissance altérée affecte la prolifération et la dynamique de la matrice extracellulaire. Une activité d’IGFBP5 dérégulée a été associée au remodelage pathologique et à la biologie tumorale, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la régulation de la croissance et de la signalisation du microenvironnement.

IGFBP5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus IGFBP5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de IGFBP5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de IGFBP5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de IGFBP5.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.