Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
IGFBP3 Double Nickase Plasmid (h): sc-400682-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das IGFBP3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- IGFBP3 Double-Nickase-Plasmid (h) und IGFBP3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf IGFBP3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: IGFBP3: sc-374365
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
IGFBP3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400682-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IGFBP3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400682-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das insulinähnliche Wachstumsfaktor-bindende Protein 3 (IGFBP3) ist ein wichtiges sezerniertes Transportprotein für IGF-I und IGF-II im menschlichen Plasma, das die Bioverfügbarkeit der Liganden und die Signalübertragung über den IGF1R moduliert und dadurch die Aktivität der PI3K–AKT- und MAPK-Signalwege beeinflusst. Über die Sequestrierung von IGFs hinaus kann IGFBP3 auch IGF-unabhängige Prozesse vermitteln, darunter Zellzyklusregulation, Apoptose, Seneszenz und Stressantworten, über Interaktionen mit Partnern an der Zelloberfläche und im Zellkern. Eine veränderte IGFBP3-Expression oder proteolytische Prozessierung wurde mit einer dysregulierten Wachstumskontrolle und entzündlichen Mikroumgebungen in Verbindung gebracht, was IGFBP3 zu einem häufigen Ziel in der Onkologie-, Stoffwechsel- und Gewebe-Remodeling-Forschung macht. Seine kontextabhängigen Rollen stützen Untersuchungen zur endokrinen/parakrinen Signalgebung, zum Crosstalk mit der extrazellulären Matrix sowie zu Transkriptionsprogrammen, die Proliferation und Überleben steuern.
IGFBP3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des IGFBP3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von IGFBP3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die IGFBP3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit IGFBP3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.