IGF-1 Receptor α/β/IGF1R Double Nickase Plasmid (m): sc-421057-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das IGF-1 Receptor α/β/IGF1R Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- IGF-1 Receptor α/β/IGF1R Double-Nickase-Plasmid (m) und IGF-1 Receptor α/β/IGF1R Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Igf1r abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: IGF-1 Receptor α/IGF1R: sc-271606
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
IGF-1 Receptor α/β/IGF1R Double Nickase Plasmid (m) | sc-421057-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
IGF-1 Receptor α/β/IGF1R Double Nickase Plasmid (m2) | sc-421057-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Igf1r kodiert den Insulin-like Growth Factor 1 Receptor (IGF-1R), eine Rezeptor-Tyrosinkinase, die als α/β-Heterotetramer synthetisiert wird und IGF-1 sowie IGF-2 bindet, um mitogene und pro-survivale Signalwege zu initiieren. Nach Ligandenbindung und Autophosphorylierung aktiviert IGF-1R die PI3K–AKT–mTOR- und die RAS–RAF–MEK–ERK-Kaskade und koordiniert dadurch Glukosestoffwechsel, Proteinsynthese, Zellzyklusprogression und die Resistenz gegen Apoptose. In der Mausbiologie ist Igf1r zentral für embryonales und postnatales Wachstum, Geweberegeneration sowie die Aufrechterhaltung von Stamm- und Vorläuferzellen; dabei besteht eine ausgeprägte Wechselwirkung mit der Signalübertragung des Insulinrezeptors und eine Rückkopplungskontrolle über IRS-Proteine. Eine fehlregulierte IGF-1R-Signalgebung wird häufig als Modellachse in Studien zur onkogenen Transformation, zu metastaseassoziierten Phänotypen sowie zu metabolischen oder entwicklungsbedingten Störungen genutzt, wobei sich eine Umverdrahtung der Signalwege in definierten genetischen Hintergründen untersuchen lässt.
IGF-1 Receptor α/β/IGF1R Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Igf1r-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Igf1r abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Igf1r-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Igf1r-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.