IGF-1 Receptor α/β/IGF1R Plasmide Double Nickase (m): sc-421057-NIC

Igf1r codifica il recettore del fattore di crescita insulino-simile 1 (IGF-1R), una tirosin-chinasi recettoriale sintetizzata come eterotetramero α/β che lega IGF-1 e IGF-2 per avviare segnali mitogenici e pro-sopravvivenza. In seguito al legame del ligando e all’autofosforilazione, IGF-1R attiva le vie PI3K–AKT–mTOR e RAS–RAF–MEK–ERK, coordinando il metabolismo del glucosio, la sintesi proteica, la progressione del ciclo cellulare e la resistenza all’apoptosi. Nella biologia del topo, Igf1r è fondamentale per la crescita embrionale e postnatale, la rigenerazione tissutale e il mantenimento di cellule staminali/progenitrici, con un marcato cross-talk con la segnalazione del recettore dell’insulina e un controllo a feedback mediato dalle proteine IRS. Una segnalazione di IGF-1R deregolata è ampiamente utilizzata come asse modello negli studi sulla trasformazione oncogenica, sui fenotipi associati alla metastasi e sui disturbi metabolici o dello sviluppo, in cui il riassetto delle vie di segnalazione può essere analizzato in contesti genetici definiti.

IGF-1 Receptor α/β/IGF1R Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Igf1r nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Igf1r. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Igf1r. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Igf1r interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.