Plásmido CRISPR de Activación (h) IFN-α/βRβ: sc-403854-ACT

IFNAR2 codifica la subunidad 2 del receptor de interferón alfa/beta (IFN-α/βRβ), un componente esencial del complejo receptor de interferón de tipo I que media las respuestas celulares a IFN-α e IFN-β. La unión del ligando activa una señalización dependiente de JAK1/TYK2 y programas transcripcionales posteriores de STAT1/STAT2-IRF9 (ISGF3), coordinando la defensa antiviral, la presentación de antígenos y la regulación de la inmunidad innata. Las vías dependientes de IFNAR2 modulan la comunicación cruzada con las señales de NF-κB y MAPK e influyen en redes de citocinas que determinan la activación de células inmunitarias y la inflamación tisular. Las alteraciones en la expresión de IFNAR2 o en su capacidad de señalización se investigan con frecuencia en contextos de expresión desregulada de genes estimulados por interferón, patología mediada por el sistema inmune e interacciones inmunitarias en tumores.

IFN-α/βRβ El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de IFNAR2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

IFN-α/βRβ El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus IFNAR2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional IFNAR2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de IFN-α/βRβ. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo IFNAR2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de IFN-α/βRβ en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía IFN-α/βRβ en células tumorales con expresión de IFNAR2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.