Plásmido Doble Nickase (h) IFN-α/βRα: sc-401662-NIC

IFNAR1 codifica el receptor alfa de interferón alfa/beta (IFN-α/βRα), una subunidad de superficie celular del receptor de interferón de tipo I que se une a IFN-α e IFN-β para iniciar la señalización de la inmunidad innata. La unión del ligando promueve la activación de las quinasas JAK1/TYK2 y de los complejos STAT1/STAT2–IRF9 (ISGF3) aguas abajo, impulsando la transcripción de genes estimulados por interferón que regulan la defensa antiviral, la presentación de antígenos y la comunicación cruzada entre células inmunitarias. La actividad de IFNAR1 también está modulada por la internalización del receptor y su recambio mediado por ubiquitina, lo que influye en la amplitud y la duración de la señalización. Las vías de interferón de tipo I desreguladas que implican a IFNAR1 se estudian ampliamente en contextos inflamatorios y autoinmunes, así como en las interacciones tumor–sistema inmunitario y en los fenotipos de respuesta huésped–patógeno.

IFN-α/βRα El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus IFNAR1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de IFNAR1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de IFNAR1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con IFNAR1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.