IFITM5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-407248

概要

IFITM5（インターフェロン誘導性膜貫通タンパク質5。BRILとしても知られる）は、骨芽細胞および骨細胞に豊富に発現する骨特異的な膜タンパク質で、骨格の発生と石灰化に寄与します。骨芽細胞の分化プログラムに関与し、細胞外マトリックスの沈着やハイドロキシアパタイト形成に影響を与えることで、膜関連シグナル伝達と骨マトリックス成熟を結び付けます。IFITM5の遺伝学的変化は、V型骨形成不全症や異常な骨リモデリング表現型と関連しており、遺伝性骨格疾患における遺伝子型—表現型の関係を研究する上で重要です。そのためIFITM5は、骨芽細胞機能、マトリックスの組織化、ならびに骨組織の恒常性を制御する経路を解析するための有用な分子学的足がかりとなります。

IFITM5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるIFITM5遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、IFITM5内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、IFITM5のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、IFITM5タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、IFITM5シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、IFITM5欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• IFITM5の機能に不可欠なIFITM5エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、IFITM5ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• IFITM5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびIFITM5 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、IFITM5遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  IFITM5 HDRプラスミド（h）および IFITM5 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはIFITM5ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のIFITM5標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。