Plásmido CRISPR de Activación (h) IFIT3: sc-403557-ACT

La proteína inducida por interferón con repeticiones tetratricopeptídicas 3 (IFIT3) es el producto de un gen estimulado por interferón que amplifica las defensas antivirales innatas aguas abajo de la señalización del interferón de tipo I y de los receptores de reconocimiento de patrones. IFIT3 actúa dentro de complejos IFIT citoplasmáticos para modular la traducción y la detección de ARN, influyendo en la inducción de genes estimulados por interferón (ISG), en la salida de la señalización JAK–STAT y en programas transcripcionales inflamatorios. Al moldear la magnitud y la persistencia de las respuestas al interferón, IFIT3 se estudia con frecuencia en el contexto de las interacciones hospedador–patógeno, la regulación inmunitaria y el estrés celular impulsado por interferón. La expresión desregulada de IFIT3 se ha asociado con microambientes inmunitarios alterados y estados inflamatorios, lo que respalda su relevancia en estudios mecanísticos de la biología de las infecciones y de procesos patológicos asociados al sistema inmunitario.

IFIT3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de IFIT3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

IFIT3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus IFIT3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional IFIT3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de IFIT3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo IFIT3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de IFIT3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía IFIT3 en células tumorales con expresión de IFIT3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.