IFIT3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403557-ACT

La proteina 3 indotta dall’interferone con ripetizioni tetratricopeptidiche (IFIT3) è il prodotto di un gene stimolato dall’interferone che amplifica le difese antivirali innate a valle della segnalazione dell’interferone di tipo I e dei recettori di riconoscimento dei pattern. IFIT3 agisce all’interno di complessi IFIT citoplasmatici per modulare la traduzione e il rilevamento dell’RNA, influenzando l’induzione degli ISG, l’output della via di segnalazione JAK–STAT e i programmi trascrizionali infiammatori. Modellando l’entità e la persistenza delle risposte all’interferone, IFIT3 è spesso studiata nel contesto delle interazioni ospite–patogeno, della regolazione immunitaria e dello stress cellulare guidato dall’interferone. Una espressione deregolata di IFIT3 è stata associata a microambienti immunitari alterati e a stati infiammatori, a supporto della sua rilevanza negli studi meccanicistici della biologia delle infezioni e dei processi patologici associati al sistema immunitario.

IFIT3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di IFIT3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

IFIT3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus IFIT3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione IFIT3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di IFIT3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus IFIT3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da IFIT3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via IFIT3 nelle cellule tumorali con espressione di IFIT3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.