Plasmide CRISPR d'Activation (h) IFI-16: sc-416568-ACT

L’IFI16 humain (IFI-16) est un capteur nucléaire de l’ADN et une protéine induite par les interférons qui contribue à coordonner la surveillance immunitaire innée des acides nucléiques anormaux ou étrangers. IFI-16 participe à la signalisation des interférons dépendante de STING ainsi qu’aux réponses associées à l’inflammasome, influençant des programmes transcriptionnels liés à la défense antivirale, au contrôle du cycle cellulaire et à la régulation associée à la chromatine. Par ses interactions avec la machinerie de réparation de l’ADN et de transcription, IFI-16 peut moduler les réponses cellulaires au stress et les voies associées à la sénescence. Une activité dérégulée d’IFI16 a été associée à la signalisation inflammatoire, à des phénotypes de restriction virale et à des mécanismes de maladies liées à l’immunité, ce qui en fait un nœud utile pour étudier la détection des acides nucléiques et les interactions entre voies des interférons.

IFI-16 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de IFI16 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

IFI-16 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus IFI16 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription IFI16, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de IFI-16. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus IFI16 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de IFI-16 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie IFI-16 dans les cellules tumorales présentant une expression de IFI16 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.