ICK Lentiviral Activation Particles (h): sc-406371-LAC

Die Intestinal Cell Kinase (ICK) ist eine Serin/Threonin-Proteinkinase aus der CMGC-Familie, die Signalreize integriert, welche die Progression des Zellzyklus, die Biologie der primären Zilie und die Dynamik des Zytoskeletts steuern. ICK lokalisiert zur Zilie und zum Basalkörper, wo sie den intraflagellären Transport und die Zilienlänge reguliert und damit mit Hedgehog-abhängiger Entwicklungssignalgebung und der Kontrolle der Proliferation verknüpft ist. Eine veränderte ICK-Aktivität wurde mit ciliopathiebezogenen Phänotypen und Entwicklungsstörungen in Verbindung gebracht, und die Fehlregulation von Kinasenetzwerken, an denen ICK beteiligt ist, wurde im Kontext aberranten Wachstums und gestörter Differenzierung untersucht. Daher ist ICK ein nützliches Ziel, um kinasegetriebene Signalwege zu analysieren, die die Ziliogenese mit Transkriptionsprogrammen und Zellzustandsübergängen koppeln.

ICK Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente ICK-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

ICK Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der ICK-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen ICK-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen ICK-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.