Plasmide Double Nickase (h) IAP: sc-401544-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) IAP correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide IAP Double Nickase (h) et le plasmide IAP Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ALPI. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: IAP Antibody (AAP.1): sc-56917
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) IAP | sc-401544-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) IAP | sc-401544-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
L’ALPI humain code la phosphatase alcaline intestinale (IAP), une ectoenzyme de la bordure en brosse qui déphosphoryle des substrats présents dans la lumière intestinale et contribue à l’homéostasie de la barrière épithéliale. L’activité de l’IAP interfère avec la régulation de l’immunité innée de la muqueuse en détoxifiant des produits microbiens phosphorylés pro‑inflammatoires et en modulant les interactions hôte–microbiote, influençant ainsi les signalisations inflammatoires en aval dans l’intestin. L’expression d’ALPI est étroitement liée à la différenciation des entérocytes et au métabolisme des nutriments, et une activité altérée de l’IAP a été associée à l’inflammation intestinale et à des phénotypes liés à la dysbiose dans des systèmes expérimentaux. En tant que marqueur fonctionnel de l’épithélium de l’intestin grêle, ALPI est fréquemment utilisé pour étudier les voies qui régissent l’intégrité de la barrière, la détection des microbes et la maturation épithéliale.
IAP Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ALPI dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ALPI. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ALPI. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ALPI.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.