HXK II Lentiviral Activation Particles (h): sc-400611-LAC

Human HK2 kodiert die Hexokinase II (HXK II), ein mitochondrienassoziiertes Enzym, das die ATP-abhängige Phosphorylierung von Glukose zu Glukose-6-phosphat katalysiert und damit Glukose der Glykolyse sowie nachgeschalteten anabolen Stoffwechselwegen zuführt. Indem es die Glukoseverwertung mit dem mitochondrialen Stoffwechsel verknüpft, unterstützt HXK II den glykolytischen Fluss, den Eintritt in den Pentosephosphatweg und metabolische Anpassungen unter Hypoxie durch die Integration in HIF-1-Signalgebung und PI3K–AKT–mTOR-regulierte Programme. Die HK2-Aktivität ist häufig mit metabolischer Umprogrammierung in proliferativen Zuständen verbunden, bei denen eine gesteigerte Glykolyse und ein verändertes Redox-Management das Überleben von Zellen und ihre biosynthetische Kapazität beeinflussen. Daher wird HK2/HXK II breit als mechanistischer Knotenpunkt genutzt, um Glukosesensorik, mitochondriale Stoffwechselkopplung und krankheitsrelevante metabolische Phänotypen in humanen Zellen zu untersuchen.

HXK II Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente HK2-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

HXK II Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der HK2-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen HXK II-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen HK2-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.