HVCN1 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-428718-ACT

Das Mausgen **Hvcn1** kodiert **HVCN1**, einen spannungsabhängigen Protonenkanal, der den Protonenausstrom vermittelt und dadurch den intrazellulären pH-Wert sowie das Membranpotenzial reguliert. In Phagozyten ist HVCN1 eng an die Aktivität der NADPH-Oxidase gekoppelt, unterstützt den Ladungsausgleich während des respiratorischen Bursts und prägt die Signalgebung über reaktive Sauerstoffspezies (ROS). Über diese Funktionen beeinflusst es die Aktivierung der angeborenen Immunantwort, die Abtötung von Mikroorganismen und redoxabhängige Signalwege in myeloiden Zellen. Eine dysregulierte HVCN1-Aktivität wurde mit veränderten Entzündungsreaktionen und Funktionsstörungen von Immunzellen in Verbindung gebracht, wodurch **Hvcn1** ein nützliches Ziel für die Untersuchung von Immunmetabolismus und oxidativem Stress in Mausmodellen darstellt.

HVCN1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Hvcn1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

HVCN1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Hvcn1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Hvcn1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen HVCN1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Hvcn1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von HVCN1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des HVCN1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Hvcn1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.